Метод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения




Скачать 85.13 Kb.
НазваниеМетод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения
Дата конвертации06.02.2016
Размер85.13 Kb.
ТипДокументы
источникhttp://diakonlab.ru/files/instrukcia_gomocistein.doc
Homocysteine FS 1 Гомоцистеин – FS

Набор диагностических реагентов для фотометрического количественного определения гомоцистеина в сыворотке или плазме in vitro

Информация для заказа

№ по каталогу

Фасовка

1 3409 99 10 730

R1 4 ×

12,5 мл

+ R2 1 ×

8 мл

+ R3 1 ×

6 мл

1 3409 99 10 930

R1 4 ×

12,5 мл

+ R2 1 ×

8 мл

+ R3 1 ×

6 мл

1 3400 99 10 041

3 ×

1 мл

TruCal Homocysteine (Калибраторы)


Справка [1, 2]


Гомоцистеин представляет собой серосодержащую аминокислоту, которая является медиатором в метиониновом цикле. Повышенный уровень гомоцистеина в плазме является чувствительным маркером недостатка фолиевой кислоты и цианкобаламина (витамина B12), а также независимым фактором риска развития сердечно-сосудистых заболеваний. Патологические концентрации гомоцистеина в плазме сопутствуют также родовым патологиям, осложнениям беременности, психиатрическим заболеваниям и старческому маразму. Тем самым, измерение гомоцистеина играет потенциально важную роль в клинической диагностике.

Метод

Метод ферментативной циклической реакции.

Принцип определения

Окисленный общий гомоцистеин восстанавливается до свободного гомоцистеина (Hcy). Свободный гомоцистеин вступает в реакцию с косубстратом S-аденозилметионином (SAM), катализируемую гомоцистеинметилтрансферазой, с образованием метионина и S-аденозилгомоцистеина (SAH), который, в свою очередь, гидролизуется SAH-гидролазой до аденозина и гомоцистеина. Образовавшийся гомоцистеин опять реагирует с гомоцистеинметилтрансферазой. Такая циклическая реакция приводит к значительному усилению определяемого сигнала.

Образовавшийся аденозин немедленно гидролизуется аденозиндезаминазой до инозина и аммиака, который вступает в глютаматдегидрогеназную реакцию с сопутствующим превращением NADH в NAD+. Снижение концентрации NADH, измеряемое при 340 нм, пропорционально концентрации гомоцистеина в пробе.

Hcy + SAM < Hcy-метилтрансфераза > Метионин + SAH




SAH < SAH-гидролаза > Аденозин + Hcy

Аденозин < Аденозиндезаминаза > Инозин + NH3

NH3 + NADH + 2-Оксоглютарат GLDH> Глютамат + NAD+ + H2O


Реагенты

Компоненты и их концентрации в реакционной смеси

NB: Концентрации приведены для окончательной тестовой смеси.

S-аденозилметионин (SAM) 0,1 ммоль/л

NADH 0,2 ммоль/л

TCEP 0,5 ммоль/л

2-Оксоглютарат 5,0 ммоль/л

Глютаматдегидрогеназа 10 кЕд/л

SAH-гидролаза 3,0 кЕд/л

Аденозиндезаминаза 5,0 кЕд/л

Гомоцистеинметилтрансфераза 5,0 кЕд/л

Стабильность и хранение

Реагенты стабильны до конца месяца, указанного в сроке годности, при хранении при 2 – 8 °C в защищённом от света месте. Не допускать загрязнений! Не замораживать реагенты!

Меры предосторожности

  1. Реагенты содержат азид натрия (менее 1 г/л) в качестве консерванта. Не глотать! Избегать попадания на кожу и слизистые оболочки!

  2. Следуйте мерам предосторожности, соблюдаемым при использовании лабораторных реагентов.

  3. Не смешивайте реагенты из наборов разных лотов.

  4. Реагенты должны быть прозрачными. На непригодность реагентов указывает их помутнение или начальное поглощение реагента 1, меньшее 0,5 (при 340 нм и оптическом пути 0,6 см).

Обезвреживание отходов

В соответствии с местными правилами.

Подготовка реагентов

3-реагентная система


Реагенты готовы к использованию.

2-реагентная система


Внести 2 мл реагента 2 в 12,5 мл реагента 1, не допуская пенообразования. Смесь стабильна в течение 2 недель в тёмном месте при 2 – 8 °C.

Необходимые материалы, не включённые в набор

0,9 % раствор NaCl.

Общее лабораторное оборудование.

Исследуемые образцы

Сыворотка или гепаринизированная плазма.

Отделить сыворотку от клеток немедленно после забора крови. Липемические или гемолизированные пробы для тестирования непригодны.

Стабильность [2]: 4 суток при 15 – 25 °C

4 недели при 2 – 8 °C

4 года при –20 °C

Загрязнённые образцы хранению не подлежат.

Процедура определения

Адаптации к биохимическим анализаторам запрашивайте дополнительно.

Параметры для Hitachi 911 (3-реагентная система):

Длина волны, нм

700 / 340 (бихроматическая)

Температура, °C

37

Измерение

По 2 точкам

Проба / Калибратор

18 мкл

Реагент 1

240 мкл

Реагент 2

38 мкл

Реагент 3

25 мкл

Внесение реагента 2

Цикл 5 (80 сек)

Внесение реагента 3

Цикл 15 (276 сек)

1-е считывание

Цикл 28 (530 сек)

2-е считывание

Цикл 31 (590 сек)

Калибровка

Линейная интерполяция

Параметры для Hitachi 911 (2-реагентная система):

Длина волны, нм

700 / 340 (бихроматическая)

Температура, °C

37

Измерение

По 2 точкам

Проба / Калибратор

18 мкл

Реагент 1+2 (смесь)

270 мкл

Реагент 3

25 мкл

Внесение реагента 3

Цикл 15 (276 сек)

1-е считывание

Цикл 28 (530 сек)

2-е считывание

Цикл 31 (590 сек)

Калибровка

Линейная интерполяция

Примечание: При выполнении анализа вручную следует пересчитать требуемые объёмы проб и реагентов, сохраняя пропорцию.


Калибровка и вычисление

Концентрация гомоцистеина в тестируемых пробах определяется по калибровочной кривой путём линейной интерполяции. Калибровочная кривая строится по поглощениям 2 калибраторов TruCal Homocysteine (уровни 1 и 2). Для анализатора Cobas Mira следует использовать калибраторы TruCal Homocysteine уровня 0 (холостая проба Cobas Mira) и уровня 2.

При 3-реагентной системе стабильность калибровки составляет не менее 5 суток. При 2-реагентной системе калибровку следует выполнять ежедневно.

Контроли

Для внутреннего контроля качества необходимо измерять в каждом пакете проб контрольные пробы DiaSys TruLab Homocysteine.

TruLab Homocysteine

№ по каталогу

Фасовка

Уровень 1

5 9770 99 10 046

3 × 1 мл

Уровень 2

5 9780 99 10 046

3 × 1 мл


Рабочие характеристики

Диапазон измерений

Тест разработан для определения концентраций гомоцистеина в диапазоне измерения до 50 мкмоль/л. Если значение превосходит верхний предел этого диапазона, необходимо развести образец в соотношении 1+1 раствором NaCl (9 г/л) и затем умножить полученный результат на 2.

Специфичность / Помехоустойчивость

Цистатионин (до 20 мкмоль/л), аденозин (до 100 мкмоль/л), L-цистеин (до 1 ммоль/л), глютатион (до 500 мкмоль/л), гемоглобин (до 1200 мг/дл), аскорбиновая кислота (до 10 ммоль/л), билирубин (до 20 мг/дл), липемия (триглицериды до 2500 мг/дл), фторид натрия (до 1 ммоль/л), фосфат натрия (до 1 ммоль/л) и аммиак (до 500 мкмоль/л) не влияют на точность анализа.
Чувствительность / Предел определения

Нижний предел определения составляет 1 мкмоль/л.
Воспроизводимость

По протоколу EP-5 NCCLS:

Внутрисерийная

n

Среднее, мкмоль/л

SD, мкмоль/л

CV, %

Образец 1

40

7,2

0,16

2,2

Образец 2

80

13,2

0,64

3,0

Образец 3

80

29,1

0,81

1,8




Межсерийная

n

Среднее, мкмоль/л

SD, мкмоль/л

CV, %

Образец 1

40

7,2

0,29

4,1

Образец 2

80

13,2

0,72

5,9

Образец 3

80

29,1

0,92

4,0

Сравнение методов

Сравнение между тестом DiaSys Homocysteine FC (y) и имеющимся в продаже тестом (x) на 72 образцах дало следующие результаты:

y = 1,013 x – 0,162 мкмоль/л; r = 0,978.


Нормальные величины [3, 4]

Женщины:

< 30 лет 6 – 14 мкмоль/л

30 – 59 лет 5 – 13 мкмоль/л

> 60 лет 7 – 14 мкмоль/л

Мужчины:

< 30 лет 6 – 14 мкмоль/л

30 – 59 лет 6 – 16 мкмоль/л

> 60 лет 6 – 17 мкмоль/л

> 85 лет 15 – 30 мкмоль/л


Каждой лаборатории рекомендуется проверить, применимы ли эти пределы нормы к её контингенту пациентов, и в случае необходимости установить собственные пределы нормы.

Литература


  1. Refsum H, Smith AD, Ueland PM, Nexo E et al. Facts and recommendations about Total Homocysteine Determinations: an Expert Opinion. Clin Chem 2004;50:3-32.

  2. Guder WG, Zawta B et al. The Quality of Diagnostic Samples. 1st ed. Darmstadt: GIT Verlag; 2001. p. 35.

  3. Schreiner H, Göbel-Schreiner B, Durst C, Casper R, Walch S. Homocysteine: reference values. Clin Lab 1997;43:1121-4.

  4. Herrmann W, Quast S, Ullrich M, Schultze H, Geisel J. The importance of hyperhomocysteinemia in high age people. Clin Lab 1997;43:1005-9.



Изготовитель

DiaSys Diagnostic Systems GmbH & Co, KG

Alte Strasse 9, 65558 Holzheim, Germany


844 3409 10 02 00 Июль 2005/1



1 FS – жидкие стабильные (fluid stable)

Homocysteine FS – Стр.

Похожие:

Метод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения iconМетод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения
Патологические концентрации гомоцистеина в плазме сопутствуют также родовым патологиям, осложнениям беременности, психиатрическим...
Метод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения iconМетоды определения адгезии гост 15140-78 ипк издательство стандартов
Настоящий стандарт распространяется на лакокрасочные материалы и устанавливает методы определения адгезии лакокрасочных покрытий...
Метод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения iconГосударственный стандарт СССР гост 15140-78 "Материалы лакокрасочные. Методы определения адгезии" (утв постановлением Госстандарта СССР от 18 мая 1978 г. N 1336)
Настоящий стандарт распространяется на лакокрасочные материалы и устанавливает методы определения адгезии лакокрасочных покрытий...
Метод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения iconФизика, 11 класс Гаврилов Андрей Владимирович, двггу
При решении задач, в которых необходимо провести расчет электрической цепи, наиболее часто используются следующие методы: метод свертывания,...
Метод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения iconМежгосударственный стандарт таллий метод химико-спектрального определения олова
Метод основан на предварительном экстракционном концентрировании олова в виде йодидного комплекса, осаждении его с гидроокисью индия...
Метод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения iconКомпьютерной мультитрековой метод связи с Тонким Миром – метод mntr
Свитнев Вадим Константинович кандидат технических наук, член Российской Ассоциации Инструментальной Транскоммуникации (раитк), капитан...
Метод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения iconПостроение и анализ траекторий крылатых ла. № варианта задания
Траектория наведения ла, метод прямого наведения, метод погони, комбинация методов, matlab, нормальная перегрузка, маневры цели,...
Метод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения iconГосударственный стандарт союза сср бронзы безоловянные метод определения меди
Утвержден и введен в действие Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 28. 06. 1977 n 1614
Метод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения iconГосударственный стандарт союза сср флюсы сварочные плавленые метод определения содержания влаги
Утвержден и введен в действие Постановлением Государственного комитета СССР по управлению качеством продукции и стандартам от 27....
Метод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения iconТема Предмет и метод экономической теории Предмет экономической теории, ее взаимосвязи с другими экономическими науками
Метод экономической теории. Экономически категории и законы, экономические потребности и интересы
Разместите кнопку на своём сайте:
Документы


База данных защищена авторским правом ©kzdocs.docdat.com 2012
обратиться к администрации
Документы
Главная страница