Метод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения




Скачать 102.55 Kb.
НазваниеМетод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения
Дата конвертации06.02.2016
Размер102.55 Kb.
ТипДокументы
источникhttp://diakonlab.ru/files/gomocistein_diasys.doc


Homocysteine FS*

Гомоцистеин



Информация для заказа

Кат. №

Фасовка

1 3409 99 10 930

R1 4 х 12,5мл

+ R2 1 × 8 мл

+ R3 1 × 6мл

Справка [1, 2]


Гомоцистеин представляет собой серосодержащую аминокислоту, которая является медиатором в метиониновом цикле. Повышенный уровень гомоцистеина в плазме является чувствительным маркером недостатка фолиевой кислоты и цианкобаламина (витамина B12), а также независимым фактором риска развития сердечно-сосудистых заболеваний. Патологические концентрации гомоцистеина в плазме сопутствуют также родовым патологиям, осложнениям беременности, психиатрическим заболеваниям и старческому маразму. Тем самым, измерение гомоцистеина играет потенциально важную роль в клинической диагностике.
Метод

Метод ферментативной циклической реакции.
Принцип определения

Окисленный общий гомоцистеин восстанавливается до свободного гомоцистеина (Hcy). Свободный гомоцистеин вступает в реакцию с косубстратом S-аденозилметионином (SAM), катализируемую гомо-цистеинметилтрансферазой, с образованием метионина и S-аденозилгомоцистеина (SAH), который, в свою очередь, гидролизуется SAH-гидролазой до аденозина и гомоцистеина. Образовавшийся гомоцистеин опять включается в реакцию, катализируемую гомоцистеинметилтрансферазой. Такая циклическая реакция приводит к значительному усилению определяемого сигнала.

Образовавшийся аденозин немедленно гидролизуется аденозиндезаминазой до инозина и аммиака, который вступает в глутаматдегидрогеназную реакцию с сопутствующим превращением НАДH в НАД+. Снижение концентрации НАДH, измеряемое при 340 нм, пропор-ционально концентрации гомоцистеина в пробе.

Hcy + SAM Метионин + SAH




SAH Аденозин + Hcy

Аденозин Инозин + NH3

NH3 + НАДH + 2-Оксоглутарат ГДГ> Глутамат + НАД+ + H2O


Hcy – Гомоцистеин

SAH – S-аденозингомоцистеин

SAM – S-аденозинметионин

ГДГ - глутаматдегидрогеназа

Реагенты

Компоненты и их концентрации в реакционной смеси

Примечание: Концентрации приведены для окончательной тестовой смеси

R1

S-аденозилметионин (SAM), ммоль/л

0,1




НАДН, ммоль/л

0,2




ТСЕР, ммоль/л

0,5




2-оксоглутарат, ммоль/л

5




Глутаматдегидрогеназа, кЕд/л

10




SAH-гидролаза, кЕд/л

3




Аденозиндезаминаза, кЕд/л

5




Гомоцистеинметилтрансфераза, кЕд/л

5

Стабильность и хранение

Реагенты стабильны до конца месяца, указанного в сроке годности, при хранении при 2 – 8 °C в защищённом от света месте. Не допускать загрязнений! Не замораживать реагенты!

Меры предосторожности

  1. Реагенты содержат азид натрия (менее 1 г/л) в качестве консерванта. Не глотать! Избегать попадания на кожу и слизистые оболочки!

  2. Следуйте мерам предосторожности, соблюдаемым при использовании лабораторных реагентов.

  3. Не смешивайте реагенты из наборов разных лотов.

  4. Реагенты должны быть прозрачными. На непригодность реагентов указывает их помутнение или начальное поглощение реагента 1 меньше 0,5 (при 340 нм и оптическом пути 0,6 см).

Обезвреживание отходов

В соответствии с местными правилами.

Подготовка реагентов

3-реагентная система


Реагенты готовы к использованию.

2-реагентная система


Внести 2 мл реагента 2 в 12,5 мл реагента 1, не допуская пенообразования. Смесь стабильна в течение 1 недели в тёмном месте при 2 – 8 °C.

Необходимые материалы, не включённые в набор

0,9 % раствор NaCl.

• Общее лабораторное оборудование
Исследуемые образцы

• Сыворотка.

• ЭДТА – или гепаринизированная плазма.

Отделить сыворотку от клеток немедленно после забора крови. Липемические или гемолизированные пробы для тестирования непригодны.

Стабильность [2]:

4 суток при 15 – 25 °C

4 недели при 2 – 8 °C

4 года при –20 °C

Загрязнённые образцы хранению не подлежат.
Процедура определения

Адаптации к автоматизированным системам запрашивайте дополнительно.

Параметры для Hitachi 911 (3-реагентная система):

Длина волны, нм

700 / 340 (бихроматическая)

Температура, °C

37

Измерение

Кинетика фикс. времени

По 2 точкам

Образец/Калибратор

15 мкл

Реагент 1

200 мкл

Реагент 2

32 мкл

Реагент 3

20 мкл

Внесение реагента 2

Цикл 5 (80 с)

Внесение реагента 3

Цикл 15 (276 с)

1-е считывание

Цикл 23 (460 с)

2-е считывание

Цикл 31 (590 с)

Калибровка

Линейная интерполяция

Параметры для Hitachi 911 (2-реагентная система):

Длина волны, нм

700 / 340 (бихроматическая)

Температура, °C

37

Измерение

Кинетика фикс. времени

По 2 точкам

Образец/Калибратор

15 мкл

Реагент 1+2 (смесь)

230 мкл

Реагент 3

20 мкл

Внесение реагента 3

Цикл 15 (276 с)

1-е считывание

Цикл 23 (460 с)

2-е считывание

Цикл 31 (590 с)

Калибровка

Линейная интерполяция

Примечание: При выполнении анализа вручную следует пересчитать требуемые объёмы проб, калибратора и реагентов, сохраняя пропорцию.

Калибровка и вычисление

Концентрация гомоцистеина в тестируемых пробах определяется по калибровочной кривой путём линейной интерполяции. Калибровочная кривая строится по поглощениям 2 калибраторов TruCal Homocysteine (уровни 1 и 2). Для анализатора Cobas Mira следует использовать калибраторы TruCal Homocysteine уровня 0 (холостая проба Cobas Mira) и уровня 2.

При 3-реагентной системе стабильность калибровки сос-тавляет не менее 5 суток. При 2-реагентной системе ка-либровку следует выполнять ежедневно.
Калибраторы и контроли

Для внутреннего контроля качества с каждой серией образцов проводите измерение контрольной сыворотки DiaSys TruLab Homocysteine.

TruLab Homocysteine

Кат. №

Фасовка

уровень 1

5 9770 99 10 046

1 × 1 мл

уровень 2

5 9780 99 10 046

1 × 1 мл

Рабочие характеристики

Диапазон измерений

Тест разработан для определения концентраций гомоцистеина в диапазоне измерения до 50 мкмоль/л. Если значение превосходит верхний предел этого диапазона, необходимо развести образец изотоническим раствором NaCl (0,9%) в соотношении 1+1 и полученный результат умножить на 2.

Специфичность/Помехоустойчивость

Цистатионин до 20 мкмоль/л, аденозин до 100 мкмоль/л, L-цистеин до 1 ммоль/л, глютатион до 500 мкмоль/л, гемоглобин до 1200 мг/дл, аскорбиновая кислота до 10 ммоль/л, билирубин до 20 мг/дл, липемия до 2500 мг/дл триглицеридов, фторид натрия до 1 ммоль/л, фосфат натрия до 1 ммоль/л и аммиак до 500 мкмоль/л не влияют на точность анализа.
Чувствительность/Предел определения

Нижний предел определения составляет 1 мкмоль/л.
Воспроизводимость

По протоколу EP-5 NCCLS (Национального комитета по клиническим и лабораторным стандартам):

Образец

n

Среднеарифметическое значение, мкмоль/л

SD, мкмоль/л

CV, %

Внутрисерийная

Образец 1

40

7,2

0,16

2,2

Образец 2

80

13,2

0,64

3,0

Образец 3

80

29,1

0,81

1,8

Межсерийная

Образец 1

40

7,2

0,29

4,1

Образец 2

80

13,2

0,72

5,9

Образец 3

80

29,1

0,92

4,0

Сравнение методов

Сравнение реагента Homocysteine FS DiaSys (y) и коммерчески доступных тестов (x) с использованием 72 образцов дало следующие результаты:

y = 1,013x – 0,162 мкмоль/л; r = 0,978.

Референсные значения [3, 4]

Женщины:

< 30 лет 6 - 14 мкмоль/л

30 – 59 лет 5 – 13 мкмоль/л

> 60 лет 7 – 14 мкмоль/л

Мужчины:

< 30 лет 6 – 14 мкмоль/л

30 – 59 лет 6 – 16 мкмоль/л

> 60 лет 6 – 17 мкмоль/л

> 85 лет 15 – 30 мкмоль/л

Каждая лаборатория должна проверить применим ли контрольный диапазон величин к местному населению, и определить, при необходимости, свой собственный диапазон нормальных величин.

Литература


  1. Refsum H, Smith AD, Ueland PM, Nexo E et al. Facts and recommendations about Total Homocysteine Determinations: an Expert Opinion. Clin Chem 2004;50:3-32.

  2. Guder WG, Zawta B et al. The Quality of Diagnostic Samples. 1st ed. Darmstadt: GIT Verlag; 2001. p. 35.

  3. Schreiner H, Göbel-Schreiner B, Durst C, Casper R, Walch S. Homocysteine: reference values. Clin Lab 1997;43:1121-4.

  4. Herrmann W, Quast S, Ullrich M, Schultze H, Geisel J. The importance of hyperhomocysteinemia in high age people. Clin Lab 1997;43:1005-9.
Изготовитель

DiaSys Diagnostic Systems GmbH

Alte Strasse 9, 65558 Holzheim, Germany




FS – жидкие стабильные (Fluid stable)

Похожие:

Метод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения iconМетод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения
Набор диагностических реагентов для фотометрического количественного определения гомоцистеина в сыворотке или плазме in vitro
Метод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения iconМетоды определения адгезии гост 15140-78 ипк издательство стандартов
Настоящий стандарт распространяется на лакокрасочные материалы и устанавливает методы определения адгезии лакокрасочных покрытий...
Метод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения iconГосударственный стандарт СССР гост 15140-78 "Материалы лакокрасочные. Методы определения адгезии" (утв постановлением Госстандарта СССР от 18 мая 1978 г. N 1336)
Настоящий стандарт распространяется на лакокрасочные материалы и устанавливает методы определения адгезии лакокрасочных покрытий...
Метод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения iconФизика, 11 класс Гаврилов Андрей Владимирович, двггу
При решении задач, в которых необходимо провести расчет электрической цепи, наиболее часто используются следующие методы: метод свертывания,...
Метод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения iconМежгосударственный стандарт таллий метод химико-спектрального определения олова
Метод основан на предварительном экстракционном концентрировании олова в виде йодидного комплекса, осаждении его с гидроокисью индия...
Метод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения iconКомпьютерной мультитрековой метод связи с Тонким Миром – метод mntr
Свитнев Вадим Константинович кандидат технических наук, член Российской Ассоциации Инструментальной Транскоммуникации (раитк), капитан...
Метод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения iconПостроение и анализ траекторий крылатых ла. № варианта задания
Траектория наведения ла, метод прямого наведения, метод погони, комбинация методов, matlab, нормальная перегрузка, маневры цели,...
Метод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения iconГосударственный стандарт союза сср бронзы безоловянные метод определения меди
Утвержден и введен в действие Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 28. 06. 1977 n 1614
Метод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения iconГосударственный стандарт союза сср флюсы сварочные плавленые метод определения содержания влаги
Утвержден и введен в действие Постановлением Государственного комитета СССР по управлению качеством продукции и стандартам от 27....
Метод Метод ферментативной циклической реакции. Принцип определения iconТема Предмет и метод экономической теории Предмет экономической теории, ее взаимосвязи с другими экономическими науками
Метод экономической теории. Экономически категории и законы, экономические потребности и интересы
Разместите кнопку на своём сайте:
Документы


База данных защищена авторским правом ©kzdocs.docdat.com 2012
обратиться к администрации
Документы
Главная страница