Исследование механизмов неспецифической рецепции




Скачать 278.15 Kb.
НазваниеИсследование механизмов неспецифической рецепции
страница1/3
Дата конвертации06.02.2016
Размер278.15 Kb.
ТипИсследование
источникhttp://psiterror.ru/bobrov/2003/1.3.1.doc
  1   2   3


ИССЛЕДОВАНИЕ МЕХАНИЗМОВ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЦЕПЦИИ


РЕЦЕПТОРНАЯ ФУНКЦИЯ ДВОЙНЫХ

ЭЛЕКТРИЧЕСКИХ СЛОЕВ


А.В. Бобров


В настоящей работе рассматриваются проблемы, связанные с рецепторной функцией живых организмов, обуславливающей их ответную реак­цию на неповреждающие воздействия окружающей среды.

В то время как механизмы фото и хеморецепции, связанные со специфическими рецептивными белками, хорошо изучены на молекулярном уровне, механизмы неспецифической реакции, возникающей в тканях живых организмов в ответ на воздействие факторов внешней среды – звука и ультразвука (УЗ), электрических, магнитных и электромагнитных (ЭМ) полей – до настоящего времени остаются неизвестными. Не выявлена структура живой ткани – материальный носитель функции, ответственный за рецепцию перечисленных факторов.

Изучение процессов, возникающих в живых организмах в результате воздействия перечисленных выше факторов, является актуальной и существенно важной задачей не только фундаментальной биофизики, но также и в плане практическом, поскольку отсутствие представлений об этих процессах может явиться причиной необоснованных санитарных норм в производстве и ошибок при дозировании как в традиционной физиотерапии, так и в относительно новых ее направлениях – магнитной и лазерной.

Одним из проявлений реакции живых организмов на внешнее воздействие является изменение их электрического состояния – электрическая реакция (ЭР). Так, при адекватных воздействиях на различные механорецепторы возникает рецепторный потенциал, который, например, в клетке Пачини может быть обусловлен как деполяризацией,

___________________________

Предлагаемая работа представляет собой 2-е переработанное адаптированное издание публикации в сборнике: “Регуляция тканевого гомеостаза. Нетоксическая профилактика и терапия хронических патологий”. Вып. ГКНТ Гр. ССР, Тбилиси, 1989 г.

так и гиперполяризацией чувствительного окончания нервного волокна [1]. В наших экспериментах ЭР в виде изменения величины электрического потенциала регистрировалась на поверхности среза кактуса при УЗ воздействии на частоте 880 кГц [2] и при дистантном воз-

действии человека [3], [4]. Механизм развития этой реакции не известен; не понятна природа сопряжения механической деформации механорецепторов с их электрическим ответом [5].

В отличие от широко распространенного представления об ответственности молекул глобулярного белка за рецепцию факторов окружающей среды, мы предположили, что она осуществляется двойными электрическими слоями (ДЭС), возникающими на поверхности раздела двух фаз [6]. Это предположение основано на следующих фактах:

- оценочные пороговые величины плотности потока мощности различных излучений, воздействующих на специфические рецепторы (звуковые и световые потоки) и на целостный организм (ЭМ поля, геомагнитные возмущения), совпадают между собой и лежат в области 10 – 12 Вт/м2 [7];

- ДЭС отвечают электрической реакцией на акустические и ЭМ воздействия [8];

- порог чувствительности ДЭС к акустическому и ЭМ воздействию совпадает или ниже порога чувствительности живых организмов к факторам окружающей среды.

Рассмотрим подробнее основные аргументы, на которых основаны наши гипотезы:

Макромолекулы белка не обладают сенсорными свойствами.

Согласно существующим представлениям, реакция белковой макромолекулы на изменение факторов окружающей среды заключается в ее конформационной перестройке, приводящей, в конечном счете, к возникновению реакции органа (организма), например, к реакции механорецепторов. Эта концепция, однако, опровергается противоречиями, возникшими еще на стадии ее зарождения, анализом результатов морфологических исследований и экспериментальных исследований на моделях.

Макромолекулы белка не чувствительны к пороговым потокам мощности воздействующих раздражителей.

В основе гипотезы о принадлежности рецепторной функции белковым молекулам лежит учение, развитое еще в сороковых годах нашего столетия Д.Н. Насоновым, об обратимом повреждении нативных протеинов аксоплазмы – паранекрозе. По его мнению, при возбуждении цитоплазмы ее белковые компоненты приходят в состояние, близкое к состоянию обратимой денатурации [9]. Несмотря на то что учение о паранекрозе развивалось при благоприятных условиях, когда была известна только одна структура, чувствительная к воздействию внешних факторов, – глобулярный белок, оно столкнулось с трудностями. Так, например, Насонов наблюдал контрактуру мышцы, наступавшую в результате звукового воздействия интенсивностью
95 дБ. Сравнивая этот результат с результатом Чамберса и Флоусдорфа, впервые наблюдавших денатурацию протеинов in vitro, Насонов заключил, что контрактура мышц, по-видимому, также наступает в результате денатурации нативных протеинов, чувствительных к звуковому воздействию [10]. Однако пороги реакции Чамберса-Флоусдорфа (обнаруженной при интенсивности звука свыше 100 дБ) и мышечной реакции Насонова-Равдоника в 105 – 106 раз превышали уже известную в те времена величину порогового уровня, при котором возникает реакция специализированного рецептора – слухового аппарата позвоночных. Насонов, признавая наличие такого противоречия, объяснить его не пытался. Между тем, проведенные нами исследования показали, что ЭР на слабые звуковые воздействия возникают не только в тканях слухового аппарата. В экспериментах, в которых на кактус производилось воздействие звуком частотой от 1 до 10 кГц, была обнаружена ЭР на поверхности среза. Порог этой реакции находится в области ниже 10-11 Вт/м2 (см. приложение 1).

Известно, что минимальная энергия, необходимая для изменения конформации белковой глобулы, определяется энергией водородных и гидрофобных связей, образующих вторичную, третичную и четверичную структуры гидратированной молекулы белка, оцениваемых величинами порядка 10-20 – 10-21 Дж. Эта энергия, оцениваемая величинами порядка 10-20 – 10-21 Дж, по крайней мере на 6 – 7 порядков выше энергии, приобретаемой белковой молекулой за 1 секунду в результате воздействия на нее звуком или ЭМ излучением пороговой интенсивности*. Это значит, что при пороговом воздействии для накопления энергии, необходимой для изменения конформации белко-

__________________________

Энергия, приобретаемая одной молекулой глобулярного белка, определялась из выражения: E = K Iпорог S, где К – коэф. поглощения (К < I); Iпорог. – пороговая плотность потока мощности для звуковых и ЭМ воздействий, равная
(1,8 - 5) 10-12 Вт/м2 [6]; S – площадь поперечного сечения белковой молекулы. При среднем диаметре 10 нм S=100 нм2=10-16м2. Отсюда Е = 510-12 Вт/м10-16 м2
10-28 Дж/сек.

вой глобулы (для разрушения хотя бы одной только водородной связи!), потребовалось бы непомерно большое время – 106-107 секунд, что противоречит известным фактам.

Жидкую фазу может заменить газообразная.

Мы предвидим возражение о необходимости учета энергии, накапливаемой не изолированной белковой глобулой, а всей открытой системой, образуемой ею и окружающей ее средой – электролитом (аксоплазмой - по Насонову), вступающим с белковой молекулой в сложные кооперативные отношения. Рассмотрим его в качестве альтернативного варианта.

Действительно, конформация белковой глобулы, образуемая S-H связями различных звеньев полипептидной цепи, определяется условием равновесного взаимодействия между белковой молекулой и средой – прежде всего, гидрофобным взаимодействием. Ясно, что любое возникающее в результате внешнего воздействия изменение полной энергии системы, должно вести к нарушению установившегося в ней равновесия и, как следствие, к изменению установившихся связей, а в конечном счете, – к изменению конформации белковой глобулы. Однако при таком сценарии конформационное изменение белковой молекулы никак не является первичным актом реакции на внешнее воздействие. Оно обусловлено накоплением энергии всей системой, в которой, как мы уже знаем, вносимая белковой молекулой доля чрезвычайно мала, и потому в рассматриваемой альтернативной модели ни о каких сенсорных свойствах белковой молекулы не может быть и речи. В реакции живого организмам на внешнее воздействие белковая глобула выступает в роли весьма существенного, но лишь передаточного звена от первичной сенсорной структуры к элементарной единице живого организма – клетке. В таком случае, в альтернативном варианте в роли сенсорной структуры, реализующей рецепторную функцию биологического объекта, должна выступать жидкость – электролит, аксоплазма, в общем случае – жидкая фаза. Возникает вопрос: обладает ли жидкая фаза сенсорными свойствами? Способна ли она инициировать реакцию на внешнее воздействие? Более того, нужна ли в принципе жидкая фаза для обеспечения рецепторной функции биологических объектов? Для ответа на поставленный вопрос была поставлена серия экспериментов с использованием в качестве модели специальной электродной системы, в которой жидкая фаза была заменена ионизированным газом – воздухом. Такая электродная система отвечала изменением межэлектродной разности потенциалов на воздействие звуком (отчет готовится к публикации)*.

Геометрический фактор исключает наличие рецепторной функции у белковых молекул.

Характер ЭР – рецепторного потенциала самых различных механорецепторов (волосковых клеток боковой линии рыб, вестибулярного и слухового аппаратов у высших организмов, клеток Пачини и т.д.) зависит от направления механического раздражения. Например, деполяризация волосковой клетки – падение величины мембранного потенциала, сопровождаемое ее возбуждением, возникает при направлении раздражения от стереоцилий к киноцилии. При обратной направленности раздражения трансмембранный потенциал возрастает. Гиперполяризация сопровождается угнетением рецепторной структуры: при равных раздражениях величина ЭР при гиперполяризации всегда меньше. Аналогичные результаты наблюдаются и при механическом раздражении клеток Пачини [1]. Эти факты свидетельствуют о том, что в механорецепторах в роли сенсорных элементов должны участвовать не белковые глобулы, а протяженные структуры – макрообъекты, соизмеримые по размерам со стереоцилиями и киноцилиями волосковых клеток или с окончанием нервного волокна в клетке Пачини. Перечисленные образования во множестве содержат молекулы нативного глобулярного белка, причем в части случаев наблюдается их четкая структурная упорядоченность (актиновые филаменты в волосковых клетках и шипиках эукариотов), в других случаях такая упорядоченность отсутствует (нервные сенсорные волокна мышечных веретен, тельце Пачини и т.д.). Однако, как для первых, так и для вторых обязательным является наличие клеточной мембраны. По мнению Хаббарда [11], причина возникновения возбуждения в клетках Пачини заключается в изменении площади поверхности мембраны нервного окончания. Трудно представить, каким образом в этом случае направленное механическое воздействие может вызвать адекватные по

___________________________

* См. работу: Бобров А.В. Об участии жидкой фазы в развитии реакции электродной системы на воздействие факторов окружающей среды. В сб. "Информационные взаимодействия в биологии. (Материалы семинара 3.10-8.10 1998 г. в Кара-Даге), Изд ТГУ, Тбилиси, 1990, с. 173-187

величине и направленности макроответы, если его основным результатом станут конформационные изменения примембранных и встроенных в мембрану (в действительности, “плавающих”) молекул белка,

количество и состояние которых изменяется от воздействия к воздействию, а местоположение вовсе не определено. Впрочем, по Насонову, речь идет не о белковых молекулах, встроенных в ту или иную структуру, а о белковых компонентах цитоплазмы, реакция которых на механическое воздействие никак не может быть адекватна направленности этого объекта или изменению геометрии макроструктуры, например волосковой клетки. Что касается роли актиновых филаментов, то они, по-видимому, выполняют свою обычную опорную функцию [12].

Сенсорная структура биологических систем включает в себя биологическую мембрану, контактирующую с жидкой фазой.

Геометрические параметры сенсорного элемента механорецепторов значительно (на порядки !) превышают средние размеры белковой глобулы. Представление о первичном сенсорном элементе как о макроструктурном (в сравнении с белковой глобулой) объекте вытекает из рассмотрения приведенных в таблице (см. приложение 2) геометрических характеристик морфологических образований – сенсорных систем различных биологических объектов. Все представленные в таблице образования – как постоянные, специализированные у высших организмов, так и динамичные (возникающие и исчезающие на поверхности простейших микроорганизмов и отдельных клеток для исследования пространства, окружающего клетку), представляют собой цилиндры длиной от нескольких единиц до сотен мкм и диаметром от десятых долей до нескольких мкм. Такое единообразие форм и размеров говорит о преобладании универсального принципа, положенного в основу построения первичного сенсорного элемента, и возможном существовании единой для всех рассматриваемых случаев рецепторной структуры. Между тем, сенсорные динамичные образования на поверхности простейших одноклеточных организмов – эукариотов, или отдельных клеток, могут быстро возникать и исчезать в произвольных областях. В этих образованиях не обнаружены какие-либо заранее существовавшие специализированные структуры, которым можно было бы приписать сенсорные свойства. Они включают в себя лишь цитоплазматическую мембрану и цитоплазму. Поскольку у простейших эукариотов отсутствует внеклеточный матрикс, это, по-видимому, означает, что сенсорными свойствами обладает либо сама мембрана, либо эта же структура с прилегающими к ней цитоплазмой внутри клетки и внеклеточной жидкостью снаружи. Эти жидкости представляют собой дисперсные системы – сложные водные растворы и суспензии с минеральными и органическими компонентами.

Второе условие – обязательного контакта цитоплазматической мембраны с жидкой средой у структур, наделенных рецепторной функцией, подтверждается следующим. У всех морфологических образований, приведенных в таблице, чувствительная к воздействующему фактору область не имеет миелиновой оболочки. Так, рецепторный потенциал в клетке Пачини возникает только в области немиелинизированного нервного окончания. Нервное волокно этого рецептора в части, покрытой миелиновой оболочкой, инертно к специфическому воздействию (см. ниже).

Из сказанного в п.п. 1.1 – 1.4 следует, что существование низких энергетических порогов, при которых осуществляется рецепторная функция живых организмов, приводит к необходимости предположить наличие как иных – не обязательно белковых – структур, осуществляющих эту функцию, так и иных механизмов развития самой реакции на внешнее воздействие, в которых конформационные перестройки глобулярного белка не исключены вовсе, но стоят не во главе причинно-следственной цепи.

Другой важный вывод вытекает из следующего: структура биологических тканей, ответственная за неспецифическую рецепцию внешних факторов, функционирует при наличии двух фаз – твердой (например, биологической мембраны – ее гидрофобной области) и жидкой, тогда как в модельных опытах последняя может быть заменена газообразной. Обязательное присутствие второй фазы свидетельствует о возможности локализации процесса рецепции на поверхности раздела фаз и прямо указывает на возможную причастность к нему двойного электрического слоя.


ДЭС принимают активное участие
в процессах жизнедеятельности.



Наше предположение о том, что ДЭС являются структурой, осуществляющей рецепторную функцию живых организмов, основано на следующем:

ДЭС являются атрибутом живой ткани, представляющей собой гетерогенную систему с разной степенью дисперсности – от лиозолей на уровне цитоплазмы и внеклеточной жидкости до грубодисперсной на уровне клеточных мембран и внеклеточного матрикса.

В общем случае ДЭС возникают на поверхности раздела фаз. Их образование связано с процессами адсорбции и диффузии, итогом которых становится повышение концентрации ионов и недиссоциированных полярных молекул, не входящих в состав веществ, образующих фазы, а также ориентирование полярных молекул сопряженных фаз у поверхности раздела [13], [14]. Образование градиента концентрации обуславливает возникновение градиента электрического потенциала.

Электрические процессы, происходящие на молекулярном уровне на поверхности раздела фаз, определяют функционирование биологических систем на всех последующих уровнях. ДЭС оказывают существенное влияние на вне- и внутриклеточные процессы. ДЭС и связанные с ними адсорбционные процессы в обогащенной углеводами периферической зоне на поверхности клетки – гликокаликсе могут влиять на функцию тканей в норме и патологии. Это влияние связано с наличием вязкоэлектрического эффекта, определяющего циркуляцию жидкости в межклеточном пространстве и подведение к цитоплазматической мембране (ЦПМ) необходимых питательных веществ [15]. По мнению Поликара, все реологические особенности межклеточного пространства определяются макромолекулярными процессами подобного рода. Не менее существенную роль поверхностные электрохимические процессы играют и в обменных процессах на уровне цитоплазмы.

По мнению Богуславского [16], особенно высока роль примембранных ДЭС, без которых невозможно осуществление многочисленных функций биологических мембран (БМ). Согласно существующим представлениям, ДЭС не только ощутимо влияют на свойства и активность БМ, но принимают непосредственное участие в присущих биологическим (в том числе цитоплазматическим) мембранам массо- и электрообменных процессах, переносе через мембрану диссоциированных и нейтральных молекул, протонов и электронов. Другими словами, ДЭС участвуют практически во всех фундаментальных процессах жизнедеятельности – дыхании животных, утилизации энергии света растениями и солелюбивыми бактериями, в окислительно-восстановительных реакциях, синаптической передаче и т.д. Так, например, потенциал ДЭС влияет на величину проницаемости бислойной фосфолипидной мембраны (являющейся, по существу, простейшей моделью БМ) для ионов [17] – [21] и для молекул воды [22] (цитируется по [16]).

Процессы, связанные с функционированием БМ, в свою очередь, не оставляют неизменной границу раздела фаз, придавая ей новые свойства – изменяя потенциал ДЭС, величину поверхностного натяжения, адсорбцию. Согласно Приложения 3, конформационные изменения встроенной в мембрану молекулы фермента сопровождающееся изменениями геометрии, площади поверхности и объема молекулы, приводит к изменению потенциала ДЭС на ее поверхности и на поверхности БМ в целом.

Все сказанное свидетельствует о глубокой взаимозависимости свойств и функциональных характеристик БМ и примембранных ДЭС и, по-видимому, делает актуальной задачу рассмотрения этих структур как единого электромолекулярного макроструктурного комплекса.

2.3. Особенности строения структурных компонентов живой клетки – макромолекул глобулярного белка и биологических мембран, рассмотренные в Приложении 3, обуславливают существование двух составляющих – дипольной и зарядовой – потенциала ДЭС по обе стороны БМ, и ДЭС гидратированной белковой глобулы


 = дип. + ион. (1).

ДЭС, возникающие по обе стороны плазматической мембраны (ПМ), асимметричны по структуре и по основным параметрам. Зарядовая часть потенциала ДЭС со стороны цитоплазмы ион. вн. возникает за счет адсорбированных из электролита ионов, заряженных аминокислотных цепей белковых молекул, встроенных в плазматическую мембрану, и заряженных фосфолипидных групп. В суммарный зарядовый компонент на внешней стороне мембраны  ион. внешн., кроме вышеперечисленных, входят заряженные боковые цепи гликолипидов, гликопротеинов и протеогликанов. Поэтому абсолютная величина отрицательного заряда на внешней поверхности ПМ всегда больше, чем на цитоплазматической поверхности:




Дипольные составляющие дип. внутр. и дип. внешн. Электрического потенциала ДЭС по обе стороны плазматической мембраны возникают за счет полярных групп перечисленных молекул и определенным образом ориентированных полярных молекул воды. Согласно [16], в бислойной фосфолипидной мембране величина дип. Значительно превышает величину ион..

Положительные концы диполей фосфолипидных молекул всегда направлены во внутреннюю область мембраны, которая в результате оказывается положительно заряженной относительно электролита, смачивающего ее поверхность. Переориентация молекул воды в области ДЭС, возникающая в результате воздействия внешнего фактора, должна приводить к изменению величины как дипольной составляющей  дип., так и потенциала ДЭС в целом.

Описанная в Приложении 3 структурная асимметрия плазматической мембраны является причиной неравенства потенциалов примембранных ДЭС. Как и в случае с упомянутой в п. 2.2 бислойной фосфолипидной мембраной, это неравенство приводит к переносу ионов по градиенту потенциала – разнополярных ионных токов через мембрану.

Разность потенциалов стороннего источника ЭДС, приложенная к поверхностям мембраны со стороны внеклеточной жидкости и цитоплазмы, изменяет величины скачков мембранного потенциала на ее поверхности, возникающих в результате специфической адсорбции потенциалопределяющих ионов из омывающих ее электролитов. Это влечет за собой изменение ионных потоков обоих полярностей через мембрану. Источником сторонней ЭДС, приложенной к поверхностям мембраны, является трансмембранная разность потенциалов или мембранный потенциал, обусловленный транспортом ионов встроенными в мембрану (K-Na)+ насосами. Другой, представляющей для нас наибольший интерес, причиной изменения величин ионных потоков через плазматическую мембрану являются факторы внешней среды – акустическое и ЭМ излучение, воздействие которых изменяет величины электрических потенциалов приэлектродных ДЭС.

Акустическое излучение создает давление – поле сил, воздействующих на примембранные ДЭС и непосредственно на мембрану, изменяя величины разнополярных ионных токов. Согласно [23], возникающее при механическом воздействии на механорецепторы поле сил изменяет величины плотности и диэлектрической проницаемости в слое Гуи и, как следствие этого – электрического потенциала ДЭС.

При электромагнитном воздействии на биологические ткани электрический компонент излучения осуществляет роль приложенного к мембране стороннего источника ЭДС и, кроме того, вызывает переориентацию полярных молекул (в том числе, молекул воды) в диффузном слое ДЭС. Такое двойное действие приводит к изменению величин диэлектрической проницаемости электролита в этом слое и, как следствие, электрических потенциалов ДЭС, расположенных по обе стороны мембраны (см. Приложение 4).

В конечном счете описанные комбинированные воздействия на примембранные ДЭС факторов внешней среды должны приводить к изменению концентрации вещества по обе стороны плазматической мембраны (к поляризации примембранных ДЭС – изменению их потенциала) и изменению разности потенциалов между внеклеточной средой и цитоплазмой (изменению величины мембранного потенциала). В свою очередь, изменение потенциалов примембранных ДЭС должно приводить к перераспределению градиентов электрических потенциалов в самой мембране, что не может не отразиться на переносе вещества (например, на работе потенциалзависимых каналов
и т.д.)

Описанные выше изменения касаются всех клеточных мембран. Таким образом, воздействие факторов внешней среды на клетку (орган, организм в целом) должно вести к нарушению установившегося режима функционирования клетки (клеток) – нарушению проходящих в ней процессов метаболизма.

  1   2   3

Похожие:

Исследование механизмов неспецифической рецепции iconИсследование сущностных механизмов, регулирующих социальное поведение индивидуума и его этнонациональную ментальность, одна из ключевых задач современного антропоцентрического направления в лингвистике. Эффективной базой изучения «поведения и состояния»
Олешков М. Ю. Лингвоконцептуальный анализ дискурса (теоретический аспект) // Дискурс, концепт, жанр: коллективная монография / Отв...
Исследование механизмов неспецифической рецепции iconИсследование деятельности конкурентов 8
Сегментация рынка и исследование целевых сегментов как основа для принятия маркетинговых решений 4
Исследование механизмов неспецифической рецепции iconИсследование систем управления
Сборник методических материалов по курсу «Исследование систем управления». – М.: Импэ им. А. С. Грибоедова, 2007. – 11 с
Исследование механизмов неспецифической рецепции iconКомплексные программы
Аст) в крови исследование уровня аланин-трансаминазы (алт) в крови исследование уровня щелочной фосфатазы (ЩФ) в крови
Исследование механизмов неспецифической рецепции iconРеферат по проекту «Исследование языковой компетенции и «языкового самоощущения»
«Исследование языковой компетенции и «языкового самоощущения» различных слоев российского общества»рук. Л. А. Вербицкая
Исследование механизмов неспецифической рецепции iconВопросы психолингвистики
И. Ю. Марковина.(Россия) Элиминирование лакун как действие социально-психологических механизмов «притяжения» и «отталкивания»
Исследование механизмов неспецифической рецепции iconПротокол №9 Заседания комиссии о проведении государственных закупок способом запроса ценовых предложений на приобретение запасных частей для машин и механизмов
Заседания комиссии о проведении государственных закупок способом запроса ценовых предложений на приобретение запасных частей для...
Исследование механизмов неспецифической рецепции iconАвтор : Солодова Илона (дипломная работа)
Метафора – это один из основных механизмов, которые мы имеем для понимания нашего опыта.”
Исследование механизмов неспецифической рецепции iconФизиология терморегуляции
Краткая характеристика механизмов физической терморегуляции (способов теплоотдачи)
Исследование механизмов неспецифической рецепции iconИсследование средневекового Казахстана, включающего проблемы функционирования кочевого скотоводческого хозяйства, эволюции социальной структуры казахского кочевого общества,
Казахстана, исследование разных сфер развития казахстанского общества (политика, экономика, культура) в различных временных срезах,...
Разместите кнопку на своём сайте:
Документы


База данных защищена авторским правом ©kzdocs.docdat.com 2012
обратиться к администрации
Документы
Главная страница